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●●●●●　mass in vivo excision (cDNA)　●●●●●

  1. 準備

    1. E.coli XL-1 blue MRF' strain LB-tet
    2. E.coli XL-1 blue SOLR strain LB-Km
    3. Ex Assist Helper Phage
    4. LB Medium, 20% Maltose
    5. 1M MgSO4
    6. 2x YT, cDNA Library
    7. 37℃, 70℃ Water-bath incubator

  2. 操作

    1. XL-1 blue MRF'シングルコロニーを3ml LB（2% Maltose、1mM MgSO4）に植菌する
    2. SOLRシングルコロニーを3ml LB（2% Maltose、1mM MgSO4）に植菌する
    3. いずれもOD600を測定し、1.0となるまで培養する。
    4. 50mlチューブに200μlのXL-1 blue、10μlのcDNAライブラリー、1μlのHelper Phageを混合する。
    5. 37℃で15分インキュベート
    6. 3mlの2xYTを加え、37℃で2.5時間振盪培養する。
    7. 70℃で20分インキュベート
    8. 5800rpmで4℃、15分遠心分離
    9. 上清を1.5mlチューブに回収する（ファージミドストック：2ヶ月は安定）
    10. ファージミドストックを1/10、1/100に希釈する。
    11. 1.5mlチューブに200μlのSOLR、1μlの希釈ファージミドストックを加える。
    12. 37℃で15分間インキュベート
    13. 50μlずつLB-Ampにプレーティングする
      この際に、0.1MIPTGを20μl、4% X-Galを40μl同時にスプレッドする。
    14. 37℃で一晩培養する。

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