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●●●●●　インサートチェックPCR　●●●●●

  1. 準備

    1. マスタープレート(作っておく)
    2. 爪楊枝
    3. PCRセット
      　10×buffer
      　dNTP mix (2.5mM each)
      　Primer (M13 Forward & Reverse, T3 & T7, gene-specific probes etc...)
      　Taq DNA polymerase

  2. 実験操作

    1. PCR反応液を調整する(以下は1サンプルの液量)
      　 Final
      10×buffer 2μl
      (25mM MgCl2) 1.5mM
      2.5mM dNTP 1.2μl
      Primer1(20mM) 0.5μl
      Primer2(20mM) 0.5μl
      Taq polymerase (5u/μl) 0.1μl
      DDW X μl
      　 20μl
    2. 各エッペンに20マイクロずつ分注する
    3. 爪楊枝の先端でコロニーを軽くつつきPCR反応液の入ったチューブに入れすすぐようにする。(ぐりぐりする)
    4. PCRは以下の条件で30サイクル行う
      94℃ 1分
      55℃ 1分
      72℃ 2-3分
      (インサートの長さによって変える。2分30秒で1.5kbくらいまで増える)
    5. 電気泳動でチェック
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