●●●●●　一般試薬の調製　●●●●●

　一般的に用いる試薬を以下に示す。これらの試薬は、以下の注意点に十分留意すること。

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1. 1M Tris-HCl
   

   Tris	121.1g	60.6g
   	1000ml	500ml

   ※　溶解後HClでpHを調整し、fill upする。
   
   
2. 0.5M EDTA
   

   EDTA 2Na･2H2O	181.6g	93.1g
   	1000ml	500ml

   ※　pHをNaOHで調整しながらfill upする。EDTAはpH 8に近づかないと溶解しない。
   
   
3. 5M NaCl
   

   NaCl	292.2g	146.1g
   	1000ml	500ml

   
   
4. 3M NaOAc(pH 5.2)
   

   CH３COONa･3H２O	408.2g	204.1g
   	1000ml	500ml

   ※　氷酢酸でpHを調整し、fill upする。
   
   
5. 10% SDS

   SDS	100g	50g
   	1000ml	500ml

   ※　68℃に加温して溶解し、HClでpH 7.2に調整する。この溶液はオートクレーブをかけてはいけない（かけると白く固まってしまう）。オートクレーブをかける場合は以下の方法で調整する。なおSDSを計量する場合は、マスク等を着用した方がよい（SDSは粘膜刺激性薬品である）。
   
   

   SDS	100g	50g
   1M Tris-HCl(pH 7.5)	50ml	25ml
   	1000ml	500ml

   ※　上記の方法のように加温して溶解する。pHを調整する必要はない。この方法で調整した場合はオートクレーブ可。なおSDSを計量する場合は、マスク等を着用した方がよい（SDSは粘膜刺激性薬品である）。
   
   
6. 30% PEG
   

   PEG＃6000(Sigma P-5413)	300g	150g
   	1000ml	500ml

   
   
7. 100×TE　(1M Tris-HCl,100mM EDTA;　pH 7.5あるいは8.0)
   

   Tris	121.1g	60.5g
   EDTA･2Na･2H２O	37.2g	18.6g
   	1000ml	500ml

   ※　HClでpH 7.5あるいは8.0に調整後、fill upする。TEは低濃度の塩溶液で変質しやすいので100×TEのstock solutionを調製しておき、50ないし100ml単位で100倍希釈液を調製し、早めに使いきる方がよい。
   
   
8. TEG (25mM Tris-HCl,10mM EDTA,50mM glucose)
   

   1M Tris-HCl(pH 8.0)	25ml	12.5ml
   0.5M EDTA(pH 8.0)	20ml	10ml
   Glucose	9g	4.5g
   	1000ml	500ml

   
   
9. 飽和フェノール
   

   フェノール	400ml
   滅菌水	400ml
   1M Tris-HCl(pH 8.0)	32ml
   8-ハイドロキノリン	0.83g

   1. 特級のフェノールは常温では固体なので、65℃のウォーターバスでフェノールを溶解し、再凝固しないように少量の滅菌水を加える。
      
   2. 滅菌したボトルに、１．の液体フェノールを400ml移す。
      
   3. 滅菌水 400mlと1M Tris-HCl(pH 8.0) 32ml、8-キシノール 0.83gを加え、激しく混合し一晩放置する。
      
   4. 2層に分離し、透明になってから使用する。オートクレーブ滅菌はしない。アルミホイルで遮光するか、あるいは褐色瓶に入れておくようにする。

   
   

10. クロロホルム／イソアミルアルコール
    

    クロロホルム	500ml
    イソアミルアルコール	20.08ml

    ※　褐色瓶あるいはアルミホイルで遮光して4℃で保存する。
    
    
11. フェノール／クロロホルム
    

    飽和フェノール	500ml
    クロロホルム／イソアミルアルコール	500ml

    ※　滅菌したボトルに加え、激しく混合する。一晩4℃で放置し、層に分かれてから使用する。
    
    
12. 20×SSC　(0.3M クエン酸ナトリウム二水和物, 3M NaCl)
    

    NaCl	175.3g	87.7g
    クエン酸Na･2H２O	88.2g	44.1g
    	1000ml	500ml

    
    
13. 20×SSPE
    

    NaCl	174.0g	87.0g
    NaH２PO４･H２O	27.6g	13.8g
    EDTA･2Na･2H２O	7.4g	3.7g
    	1000ml	500ml

    
    
14. LB培地
    

    	1×	2×
    Bacto-Tryptone	10g	20g
    Bacto-Yeast Extract	5g	10g
    NaCl	5g	10g
    Glucose	1g	2g
    	1000ml	1000ml

    ※　寒天培地：LB液体培地にBacto-Agarが1.5%の割合になるように入れる。
    
    
15. 10×KCM　(1M KCl, 0.3M CaCl２, 0.5M MgCl２)
    

    KCl	7.46g
    CaCl２･2H２0	4.41g
    MgCl２･6H２0	10.17g
    	100ml

    
    
16. IPTG溶液　(1M イソプロピル-β-D-チオ-ガラクトピレノシド)
    

    IPTG	0.238g
    	10ml

    ※　濾過滅菌し、-20℃に保存。使用時には解凍した後、1度ボルテックスしてから使用する。
    ※　寒天培地に加える場合(プラスミドの場合)は、10μl/100ml(final 0.1mM)
    ※　トップアガー･アガロースに加える場合(ファージの場合)は、2.5μl/3ml
    
    
17. X-gal溶液　(2% 5-プロモ-4-クロロ-3-インドリル-β-D-ガラクシド)
    

    X-gal	40mg
    ジメチルホルムアルデヒド	2ml

    ※　-20℃に遮光保存。
    ※　寒天培地に加える場合(プラスミドの場合)は、100μl/100ml(final 20μl/ml)
    ※　トップアガー･アガロースに加える場合(ファージの場合)は、25μl/3ml
    
    
18. DNase free RNase(リボヌクレアーゼA溶液)
    

    RNase A(Sigma R-4875)	100mg
    1M Tris-HCl(pH 7.5)	100μl
    5M NaCl	30μl
    	10ml

    ※　よく混合し、110℃で15分間加熱して氷で急冷する。
    ※　1mlに小分けしてエッペンチューブに分注し、-20℃で保存する。
    
    
19. TAE
    

    Tris	48.4g
    Acetic acid	14.4ml
    EDTA	3.72g
    	10 L

    
    
20. 10×Dye
    

    ブロムフェノールブルー(BPB)	42mg
    キシレンシアノール(XC)	42mg
    グリセロール	5g
    	10ml

    
    
21. 
    

　以上が、一般的に用いる試薬類である。注意事項を守ってチェックしながら作成すること。他の人も使うので十分に注意する。

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